IDENTIFIKASI BAHAN BAKU KULIT RAMBAK MENGGUNAKAN GEN CYTOCHROME B (CYT B) DENGAN TEKNOLOGI PCR-RFLP

RULLI RIANA DEWI, Yuny Erwanto, S.Pt., MP., Ph.D ; Nanung Agus Fitriyanto, S.Pt., M.Sc., Ph.D

2016 | Tesis | S2 Ilmu Peternakan

Penelitian ini bertujuan untuk mengaplikasikan metode identifikasi spesies sapi dan kerbau secara individual maupun campuran komposit kulit berdasarkan gen cytochrome b dengan teknik Polymerase Chain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP). Jenis sampel yang digunakan berupa kulit sapi segar yang diperoleh dari pemotongan hewan di Yogyakarta dan kulit kerbau segar dari Kudus. Sampel digunakan untuk mengukur kemampuan deteksi level kulit kerbau yang digunakan dalam campuran sebesar 10, 20, 40, 60, dan 80%. Isolasi DNA dilakukan dengan metode Sambrook yang dimodifikasi. Kemurnian DNA diukur dengan metode spektrofotometer. PCR untuk amplifikasi gen target dengan universal primer cyt b dilakukan sebanyak 35 siklus. Identifikasi spesies dilakukan dengan mendigesti amplikon hasil PCR dengan menggunakan enzim AluI dan RsaI. Dari hasil penelitian yang diperoleh menunjukkan bahwa DNA yang didapatkan kurang murni tetapi DNA dari semua sampel dapat diisolasi dengan baik. Template DNA yang kurang murni dapat menghasilkan target gen berupa cytochrome b dari mitokondria yang menghasilkan fragmen DNA sebesar 359 bp melalui proses PCR. Setelah itu, dari amplikon hasil PCR dilanjutkan digesti dengan enzim restriksi AIuI yang menghasilkan fragment DNA 190 bp pada spesies sapi dan kerbau sehingga sulit membedakan antar spesies sapi dan kerbau. Digesti dengan enzim RsaI menghasilkan fragment DNA di 326 bp pada spesies kerbau dan pada sapi band berada di 359 bp. Hal ini menunjukkan bahwa spesies sapi tidak dapat di digesti menggunakan RsaI. Enzim RsaI dapat digunakan untuk menentukan spesifikasi spesies kerbau. Metode PCR-RFLP merupakan teknik yang potensial untuk menganalis identifikasi keberadaan unsur sapi atau kerbau pada produk kulit segar.

The aim of this study was to apply a method in the identification of cattle and buffalo spesies individually or mixture of hides based on cytochrome b using PCR-RFLP method as a basic in determination. Samples cattle and buffalo hides were obtained from slaughterhouse at Yogyakarta and slaughterhouse at Kudus city respectively. The samples of buffalo-hides were used to measure the level of detection capability in various levels at 10, 20, 40, 60, and 80%. Sambrook method was used fot DNA isolation. DNA purification was measured by spectrophotometer. Amplification of target gene with universal primers of cytochrome b was performed for 35 cycles. Species identification were applied to digested PCR products by AluI and RsaI restriction enzyme. The result showed that DNA was less pure but DNA from all samples was succesfully isolated. The mitochondrial cytochrome b gene was successfully amplified resulted 359 bp fragments. The amplicons of the cattle and buffalo hide were cut into 190 bp fragments by AluI restriction enzyme. The digestion with RsaI enzyme cleaved the cyt b gene products of buffalo into one DNA fragments of 326 bp. The results of this study was also indicated that mixture-hides could be digested by AluI and RsaI restriction enzyme and could be detected until level 10%. RsaI enzyme could be used to identification buffalo spesies. PCR-RFLP technology has a potential method to identification of existence of cattle or buffalo hides.

Kata Kunci : Identifikasi, kulit sapi dan kerbau, Cytochrome b, PCR- RFLP.