Laporkan Masalah

HUBUNGAN METILASI PROMOTER GEN TOLL-LIKE RECEPTOR 4 (TLR4) DAN INTERLEUKIN-6 (IL6) DENGAN RESISTENSI INSULIN PADA SEL DARAH TEPI REMAJA DENGAN OBESITAS DI DAERAH ISTIMEWA YOGYAKARTA

RATIH FERARITRA DANU ATMAJA, dr. Ahmad Hamim Sadewa, Ph.D; dr. Rina Susilowati, Ph.D

2016 | Tesis | S2 Ilmu Kedokteran Dasar dan Biomedis

Latar Belakang. Inflamasi kronik diketahui dapat memicu terjadinya resistensi insulin pada obesitas. Peningkatan ekspresi mRNA petanda inflamasi seperti toll - like receptor 4 (TLR4) dan interleukin - 6 (IL6) dilaporkan meningkat baik pada jaringan maupun pada darah perifer individu dengan obesitas. Metilasi DNA disekitar transcription start site (TSS) diketahui berperan dalam regulasi tingkat ekspresi suatu gen. Tujuan. Mengetahui status metilasi promoter TLR4 dan IL6 pada darah perifer remaja dengan obesitas dan korelasinya terhadap resistensi insulin (HOMA - IR). Metode. Penelitian ini merupakan penelitian observational analitik dengan rancangan cross sectional. Sebanyak 50 remaja dengan obesitas dipilih sebagai subjek dalam penelitian ini dengan kriteria inklusi berusia 15-18 tahun, mengalami obesitas dengan z - score > 2 SD, tidak mengalami infeksi dalam 2 minggu terakhir dan menandatangai persetujuan sebagai subjek. Subjek yang mengalami diabetes melitus, data tidak lengkap dan konsentrasi DNA < 20 µg/mL akan dikeluarkan sebagai subyek. Sampel yang digunakan adalah DNA yang diekstraksi dari darah tepi selanjutnya dikonversi menggunakan bisulfit. Resistensi insulin ditentukan berdasarkan nilai Homeostatic Model Assasment Insulin Resistance (HOMA-IR) yaitu > 3,2. Penentuan tingkat metilasi dilakukan menggunakan Direct – Bisulfite PCR (Direct - BSP) dengan metode sanger. Analisis statistik dilakukan dengan uji korelasi Spearman. Signifikansi ditandai dengan nilai p < 0,05 Hasil. Seluruh subjek tidak menunjukkan adanya metilasi pada promoter target TLR4. Data tingkat metilasi IL6 ditransformasi ke dalam bentuk kategorikal sehingga diperoleh kelompok subjek termetilasi terdiri atas 4 subjek (8 %) mengalami resistensi insulin sedangkan 2 subjek (4 %) tidak mengalami resistensi insulin dari total subjek. Tingkat metilasi IL6 antara kelompok resisten insulin dengan non-resisten tidak berbeda signifikan (p = 0,635). Tidak terdapat korelasi signifikan (p > 0,05) antara metilasi IL6 dengan resistensi insulin (HOMA - IR)(r = 0,051). Karakteristik subjek, mekanisme metilasi yang spesifik setiap sel, dan jenis sampel diduga menyebabkan rendahnya hasil yang diperoleh. Kesimpulan. Tidak ditemukan korelasi antara tingkat metilasi promoter TLR4 dan IL6 dengan resistensi insulin pada sel darah tepi remaja dengan obesitas.

Background. The chronic inflammation was known can lead to insulin resistance in obesity. Increased mRNA expression of inflammatory markers such as TLR4 and IL6 were reported both in the tissue and the peripheral blood of obese adolescent and correlated with insulin resistance. DNA methylation surrounding TSS region was known to regulate the level of a gene expression. Objective. To investigate the correlation between methylation level of TLR4 and IL6 promoter with insulin resistance in obese adolescent. Methods. This research was a cross sectional study with observational analytic approached. Fifty adolescent, aged 15-18 years, z-score value > 2 SD, no experience an acute infection within 2 weeks and sign in informed concent, was chosen as a subject. Subject with diabetic mellitus, incomplete data and DNA consentration < 20 µg / mL would be exclude. DNA sample was extracted from peripheral blood of 50 adolescent with obesity. The bisulfite converted DNA was analyzed for methylation level with direct sequencing. Statistic analysis was performed by Chi-Square dan Spearman test with significancy p < 0.05. Result. There was no methylation in TLR4 promoter detected in all subject. The methylation level of IL6 was transformed to categorical variabel. Four (8 %) subject with insulin resistence and 2 (4 %) without insulin resistance has methylation on a CpG site. Methylation of IL6 was not statisticaly different between insulin resistance and non-resistance adolescent (p = 0.635). The significant correlation was not found between methylation level in IL6 promoter with insulin resistance (HOMA - IR) (r = 0.051). Cell specific of methylation mechanism, characteristic of subjects and types of samples was suspected causing those results. Conclusion. There was no correlation found between methylation levels of promoter TLR4 and IL6 with insulin resistance in obese adolescent.

Kata Kunci : Obesity, methylation, insulin resistance, TLR4, IL6, sequencing

  1. S2-2016-354130-abstract.pdf  
  2. S2-2016-354130-bibliography.pdf  
  3. S2-2016-354130-tableofcontent.pdf  
  4. S2-2016-354130-title.pdf