Produksi penisilin semisintetik untuk menghasilkan 6-APA yang paling mudah dan menguntungkan adalah metode hidrolisis penisilin secara enzimatik dengan menggunakan katalisis enzim penisilin asilase. Salah satu mikroba penghasil pensilin asilase yang telah dilaporkan memiliki aktivitas lebih baik daripada Eschericia coli adalah Alcaligenes faecalis (A. faecalis). Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kondisi optimal kinerja enzim penisilin asilase dari bakteri A. faecalis dengan mengetahui dan mengontrol pengaruh pH, konsentrasi substrat, dan jenis bufer, dalam mengkatalisis hidrolisis penisilin G menjadi 6-APA. Penelitian dilaksanakan dengan menghitung produksi 6-APA yang dihasilkan oleh hidrolisis penisilin G, dengan katalisis enzim penisilin asilase A. faecalis menggunakan analisis HPLC. Penelitian dilakukan menggunakan pelarut bufer fosfat dengan variasi pH 7,0, 8,0, 9,0 dan 10,0 untuk menentukan pH optimalnya. Selanjutnya dilakukan penentuan konsentrasi substrat optimal untuk produksi 6-APA dalam pH optimalnya, dengan variasi konsentrasi substrat 5, 6 dan 7%, dan pemilihan bufer yang paling sesuai antara bufer fosfat dan bufer Tris-(hidroksimetil)-aminometan. Hasil analisis memberikan kondisi optimal untuk kerja enzim yaitu pH 7,0 dengan konsentrasi substrat 6% dan media hidrolisis bufer fosfat.

-

Kata Kunci : 6-APA, A. faecalis, hidrolisis, penisilin asilase